Descrição
PURIFICA™ são resinas cromatográficas de sílica porosa especialmente desenvolvidas pela Kopp Technologies para purificação de moléculas de interesse por cromatografia ou adsorção direta em batelada, tanto em escala de laboratório quanto em escala industrial.
As resinas cromatográficas PURIFICA™ da Kopp Technologies são produzidas com duas diferentes estruturas de poros, PURIFICA-X possui poros pequenos na faixa de 6 nm sendo o material ideal para a purificação de compostos químicos de baixo peso molecular como metabólitos secundários ou produtos naturais. PURIFICA-Y, por sua vez, possui poros maiores na faixa dos 12 nm, sendo ideal para a purificação de proteínas e polipeptídeos de até 40 KDa. As resinas cromatográficas da Kopp Technologies são produzidas empregando altos padrões de qualidade, a química de superfície dos materiais é modificada gerando um amplo portfólio de produtos divididos em 5 classes que juntas contemplam a grande maioria das estratégias de purificação existentes, tanto em escala de bancada quanto em escala industrial.
PURIFICA™ Série H são resinas cromatográficas que contém em sua superfície uma alta densidade de grupos hidrofóbicos com diferentes graus de hidrofobicidade especialmente desenvolvidos para a purificação de substâncias por interação hidrofóbica. PURIFICA™ Série H foi desenvolvido para a purificação altamente seletiva de proteínas (PURIFICA-Y) e também de outros compostos químicos e/ou bioquímicos de menor peso molecular por interação hidrofóbica (PURIFICA-X).
As resinas cromatográficas PURIFICA-Y Série H podem ser utilizadas para a purificação altamente seletiva de proteínas com diferentes graus de hidrofobicidade. As resinas e colunas cromatográficas PURIFICA-Y Série H produzidas pela Kopp Technologies podem ser utilizadas no desenvolvimento de processos de purificação de proteínas, ou outras substâncias, altamente seletivos rendendo produtos com elevado grau de pureza. PURIFICA-Y Série H pode ser utilizado em qualquer etapa de purificação de proteínas dentro da estratégia captura > purificação intermediária > polimento (CIPP).
Características Técnicas
PURIFICA-Y C1 é uma resina cromatográfica desenvolvida pela Kopp Technologies para possuir características levemente hidrofóbicas. O material apresenta em sua superfície uma alta densidade de grupos hidrofóbicos de 1 carbono (C1) pouco flexível e que gera uma superfície hidrofóbica estática, que interage em uma única dimensão com a superfície da proteína, originando uma interação hidrofóbica débil e fácil de romper. Esse material é indicado principalmente para a purificação seletiva de proteínas altamente hidrofóbicas em meios de baixa força iônica (5-50 mM) e de proteínas pouco ou moderadamente hidrofóbicas em meios de média (50-200 mM) e elevada força iônica (>200 mM). A dessorção seletiva da proteína alvo pode ser realizada mediante a redução gradativa da força iônica do tampão empregado na dessorção ou através do uso de pequenas concentrações de agentes surfactantes no tampão de dessorção. PURIFICA-Y C1 pode ser utilizado em qualquer etapa de purificação de uma proteína dentro da estratégia CIPP. PURIFICA-Y C1 apresenta máximo desempenho na purificação de proteínas com até 40 KDa, embora possa utilizado de forma bem sucedida para purificação de proteínas maiores.
*O procedimento cromatográfico utilizado para cálculo da capacidade dinâmica de adsorção de proteínas no material foi o seguinte: Equilíbrio - Passagem de tampão fosfato, 25 mM pH 7.0 a 1 cv/min por 15 minutos; Injeção da amostra - Passagem de solução de lisozima 1 mg/mL em tampão fosfato, 25 mM pH 7.0 até saturação.
PROCEDIMENTO DE PURIFICAÇÃO De Lisozima (LS)
* CV = Column Value (volume de coluna)
SDS = Dodecil sulfato de sódio
PURIFICAÇÃO DE LS EM PURIFICA-Y C1
Como Usar
PURIFICA-Y Série H foi desenvolvido para a purificação de proteínas em solução por interação hidrofóbica (HIC), e pode ser utilizado na forma de colunas cromatográficas ou diretamente para adsorção da proteína alvo em regime de batelada. PURIFICA-Y Série H pode ser empregado para purificar qualquer proteína, desde que a proteína alvo possua aminoácidos hidrofóbicos acessíveis em sua superfície externa capazes de formar interações hidrofóbicas com a superfície do material. Proteínas altamente hidrofóbicas, ou seja com uma ampla superfície hidrofóbica acessível para interação, podem ser adsorvidas em qualquer um dos materiais PURIFICA-Y Série H de forma bastante seletiva em meios de baixa força iônica (PURIFICA-Y Série H de forma seletiva em meios de moderada (50-200 mM) ou alta força iônica (>200 mM). A adição de sais a solução contendo a molécula alvo antes do procedimento cromatográfico ou de adsorção favorece a interação hidrofóbica, desta forma, em teoria, quanto maior a força iônica do meio maior a adsorção da proteína alvo por interações hidrofóbicas. Para favorecer a adsorção de proteínas pouco ou moderadamente hidrofóbicas recomendamos adicionar ao meio de purificação sais como sulfato de amônio ou cloreto de sódio ou diluir a proteína alvo em tampões contendo esses sais, é necessário tomar cuidado pois a adição excessiva de sais pode diminuir em demasia a solubilidade da proteína alvo dificultando o processo de purificação e até mesmo causando precipitação da proteína alvo. O pH do meio geralmente têm influência limitada sobre o processo de purificação de proteínas por interação hidrofóbica, no entanto recomendamos realizar o procedimento de purificação em um valor de pH próximo ao ponto isoelétrico da proteína alvo (PI) ou em valores de pH próximos ao neutro. Para alguns materiais PURIFICA-Y Série H, condições diferentes das recomendadas podem ser utilizadas para aumentar a seletividade do procedimento de purificação. Para a purificação de proteínas o meio deve ser antes clarificado, ou seja deve estar livre de sólidos em suspensão que possam entupir a coluna. Para dessorção seletiva de proteínas alvo pouco ou moderadamente hidrofóbicas adsorvidas em meios de alta força iônica recomendamos o uso do mesmo tampão empregado no procedimento de adsorção contendo concentrações decrescentes de sal, formando um gradiente salino. Para dessorção de proteínas altamente ou moderadamente hidrofóbicas adsorvidas em meios de baixa força iônica recomendamos o uso de concentrações crescentes de surfactantes capazes de quebrar as interações hidrofóbicas, formando um gradiente de surfactante. Recomendamos o uso de surfactantes como CTAB, Triton-X 100 e SDS em concentrações entre 0.05-2.5% v/v ou m/v, é importante checar a estabilidade da molécula alvo na presença do surfactante empregado no procedimento pois alguns surfactantes podem afetar negativamente as propriedades bioquímicas da proteína alvo e até mesmo causar desnaturação. Para proteínas adsorvidas muito fortemente a superfície do material recomendamos uso simultâneo das estratégias de redução da força iônica do meio e adição de surfactantes. Recomendamos utilizar os materiais PURIFICA-Y Série H na faixa de pH entre 3.0-8.5, o uso em valores de pH superiores a 8.5 pode ocasionar deterioração do material e diminuir sua vida útil.
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