Descrição
PURIFICA™ são resinas cromatográficas de sílica porosa especialmente desenvolvidas pela Kopp Technologies para purificação de moléculas de interesse por cromatografia ou adsorção direta em batelada, tanto em escala de laboratório quanto em escala industrial.
As resinas cromatográficas PURIFICA™ da Kopp Technologies são produzidas com duas diferentes estruturas de poros, PURIFICA-X possui poros pequenos na faixa de 6 nm sendo o material ideal para a purificação de compostos químicos de baixo peso molecular como metabólitos secundários ou produtos naturais. PURIFICA-Y, por sua vez, possui poros maiores na faixa dos 12 nm, sendo ideal para a purificação de proteínas e polipeptídeos de até 40 KDa. As resinas cromatográficas da Kopp Technologies são produzidas empregando altos padrões de qualidade, a química de superfície dos materiais é modificada gerando um amplo portfólio de produtos divididos em 5 classes que juntas contemplam a grande maioria das estratégias de purificação existentes, tanto em escala de bancada quanto em escala industrial.
PURIFICA™ Série P são resinas cromatográficas que contém em sua superfície diferentes grupos químicos com cargas positivas fortes e fracas. PURIFICA™ Série P foi desenvolvido para a purificação altamente seletiva de moléculas carregadas negativamente (troca aniônica) e pode ser utilizado tanto para a purificação de compostos químicos de baixo peso molecular (PURIFICA-X) quanto para a purificação de proteínas (PURIFICA-Y).
As resinas cromatográficas PURIFICA-Y Série P podem ser utilizadas para a purificação altamente seletiva tanto de proteínas com alta densidade de cargas negativas em sua superfície quanto de proteínas pouco carregadas negativamente. As resinas e colunas cromatográficas PURIFICA-Y Série P produzidas pela Kopp Technologies podem ser utilizadas no desenvolvimento de processos de purificação de proteínas, ou outras substâncias, altamente seletivos rendendo produtos com elevado grau de pureza. PURIFICA-Y Série P pode ser utilizado em qualquer etapa de purificação de proteínas dentro da estratégia captura > purificação intermediária > polimento (CIPP).
Características Técnicas
PURIFICA-Y NC5 é uma resina cromatográfica que contém em sua superfície uma alta densidade de grupos aminopropil bloqueados com um grupo C5, gerando uma amina secundária. O material apresenta em sua superfície uma camada de grupos funcionais altamente uniforme e com baixa flexibilidade e mobilidade. A resina cromatográfica PURIFICA-Y NC5 possui alta capacidade de adsorção de proteínas carregadas negativamente, sendo ideal para a adsorção seletiva de proteínas com baixa densidade de resíduos de aminoácidos com carga negativa em sua superfície em meios de baixa força iônica (CIPP). PURIFICA-Y NC5 pode adsorver com boa seletividade proteínas com carga levemente negativa, e dessorver de forma seletiva proteínas com diferentes densidades de cargas negativas mediante uso de gradiente salino. PURIFICA-Y NC5 apresenta máximo desempenho na purificação de proteínas com até 40 KDa, embora possa utilizado de forma bem sucedida para purificação de proteínas maiores.
*O procedimento cromatográfico utilizado para cálculo da capacidade dinâmica de adsorção de proteínas no material foi o seguinte: Equilíbrio - Passagem de tampão histidina, 25 mM pH 6.0 a 1 cv/min por 15 minutos; Injeção da amostra - Passagem de solução de proteína de soja fração solúvel 1 mg/mL em tampão histidina, 25 mM pH 6.0 até saturação.
PROCEDIMENTO DE PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNA DE SOJA FRAÇÃO SOLÚVEL (PS)
* CV = Column Value (volume de coluna)
Obs - PS é uma mistura de várias proteínas da fração solúvel da proteína de soja, e por isso a existência de mais de um pico é possível.
Como usar
PURIFICA-Y Série P foi desenvolvido para a purificação de proteínas em solução por troca aniônica (AEX), e pode ser utilizado na forma de colunas cromatográficas ou diretamente para adsorção da proteína alvo em regime de batelada. PURIFICA-Y Série P pode ser empregado para purificar qualquer proteína, desde que a proteína alvo esteja carregada negativamente, ou seja esteja em um valor de pH acima de seu ponto isoelétrico (PI), e se encontre em um ambiente químico com baixa ou moderada concentração de íons (baixa ou moderada força iônica). Para procedimentos de purificação mais seletivos de proteínas empregando PURIFICA-Y Série P recomendamos que o pH do meio seja entre 0.25-1 unidade de pH acima do PI da proteína (ex. se o PI da proteína alvo for 7.0, utilizar pH entre 7.25-8.00), recomendamos também utilizar valores de força iônica entre 5-50 mM para garantir a adsorção da molécula alvo na resina cromatográfica. Para alguns materiais PURIFICA-Y Série P condições diferentes das recomendadas podem ser utilizadas para aumentar a seletividade do procedimento de purificação. Para a purificação de proteínas o meio deve ser antes clarificado, ou seja deve estar livre de sólidos em suspensão que possam entupir a coluna. É interessante em alguns casos ajustar o pH e a força iônica do meio empregando diálise contra o tampão que será utilizado no procedimento para controlar de forma precisa o pH e a força iônica do meio, alternativamente a amostra pode ser diluída em um tampão adequado para ajuste de pH e força iônica. Para dessorção seletiva da proteína alvo do material recomendamos o uso do mesmo tampão empregado no procedimento de adsorção acrescido de concentrações crescentes de sal formando um gradiente salino, recomendamos o uso de cloreto de sódio ou sulfato de amônio. Para dessorção de proteínas adsorvidas muito fortemente recomendamos reduzir o pH do tampão de dessorção em até uma unidade de pH e aplicar um gradiente salino. Recomendamos utilizar os materiais PURIFICA-Y Série P na faixa de pH entre 3.0-8.5, o uso em valores de pH superiores a 8.5 pode ocasionar deterioração do material e diminuir sua vida útil.
